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代谢工程改造大肠杆菌生产琥珀酸

作者:admin 发布时间:2021/07/28 浏览量:124


本期为您推荐江南大学食品科学与技术国家重点实验室,国际食品安全联合实验室刘立明教授研究团队发表在《化工进展》上的一篇文章:代谢工程改造大肠杆菌生产琥珀酸。

 

文章摘要内容如下:

琥珀酸作为一种重要的四碳二羧酸,在食品、化学、制药以及农业等领域具有广泛的应用价值。由于化学合成法生产琥珀酸存在很多弊端,近年来以微生物细胞工厂利用可再生资源生产琥珀酸受到了越来越多的关注。然而,微生物法生产琥珀酸存在得率低、生产强度低、副产物积累等问题。

 

本研究通过复合诱变(ARTP和60Co-γ射线)筛选到一株耐高渗突变菌FMME-N-2,其琥珀酸得率为0.70g/g葡萄糖,同时积累18.8g/L乳酸,7.6g/L甲酸和17.3g/L乙酸。为了提高琥珀酸得率,通过敲除乳酸脱氢酶基因(ldhA)、丙酮酸-甲酸裂解酶-甲酸转运蛋白基因(pflB-focA)、磷酸转乙酰基基因(pta)丙酸激酶基因(tdcD)和a-酮丁酸甲酸酯裂解酶基因(tdcE),阻断冗余代谢支路减少副产物积累,获得工程菌株FMME-N-13,琥珀酸得率增加到0.92g/g葡萄糖,同时副产物大大降低,积累0.6g/L乳酸,3.6g/L甲酸和12.3g/L乙酸。同时,通过调控RBS强度组合优化来自产琥珀酸放线杆菌的磷酸烯醇式丙酮酸羧基酶基因(AsPCK)和来自博伊丁假丝酵母的甲酸脱氢酶基因(CbFDH)的表达水平,调控胞内ATP和NADH的浓度,最优工程菌FMME-N-26(FMME-N-13-L-AsPCK-L-CbFDH)的琥珀酸得率增加至1.04g/g葡萄糖,仅积累5.5g/L乙酸;最终,对厌氧阶段葡萄糖浓度进行优化,当葡萄糖浓度控制在0-5g/L时,菌株FMME-N-26的琥珀酸浓度增加到111.9g/L,得率为1.11g/g葡萄糖(理论产率的99%),生产强度为1.76g/L/h,为琥珀酸的工业化生产奠定了良好的基础。

 

文章精彩内容如下: 

图片1

2 耐高渗琥珀酸生产菌株的筛选与表征


图片2

4 调控AsPCK与CbFDH的表达优化辅因子含量

 

图片3

5 菌株FMME-N-26的两阶段发酵结果